中国心脏移植队列的 dd-cfDNA 探索性阈值：阜外医院前瞻性研究结果

心脏移植术后的急性排斥，长期依赖心内膜心肌活检（endomyocardial biopsy，EMB）发现，但该检查有创，且存在采样误差与阅片差异。供体来源游离 DNA（donor-derived cell-free DNA，dd-cfDNA）通过血液样本反映移植物损伤，为无创、可重复的监测提供了新的方向。

2026 年 10 月 5 日，中国医学科学院阜外医院刘盛教授团队在《Transplant International》发表前瞻性研究，在中国心脏移植受者中系统评估 dd-cfDNA 的术后动态、与活检结果的关系及抗排斥治疗后的变化。研究纳入 80 例受者、299 份血浆样本；论文将其表述为中国心脏移植受者队列中首次建立的 dd-cfDNA 探索性阈值（0.33%）。奥根诊断（AlloDx）为本研究提供 dd-cfDNA 检测服务与方法学技术支持。

图1　研究图形摘要。展示队列构成、术后动态、排斥识别及治疗后变化；两个队列存在受者重叠，合计 80 例独立受者。来源：Zheng 等，2026，CC BY。

一、研究背景：既有阈值多来自欧美人群

既往 dd-cfDNA 的判读阈值，多数来自以欧美人群为主的队列。中国受者的遗传背景、供受者组合与免疫抑制方案与之不同，直接套用既有阈值可能带来判读偏差。本研究以 EMB 病理结果为参照，在中国受者中探索 dd-cfDNA 的分布特征及其识别急性排斥的能力。

论文第一作者郑珊珊表示：「我们希望以中国心脏移植受者的前瞻性数据，为 dd-cfDNA 在东亚人群中的应用提供依据。」

二、方法与队列：48 个 Indel 标记结合超高深度 NGS

研究采用基于插入/缺失（insertion-deletion，Indel）遗传标记的检测方法：针对东亚人群优化的 48 个 Indel 标记，结合超高深度下一代测序（next-generation sequencing，NGS），定量检测血浆中的供体来源 DNA。该方法无需单分子标签，线性可定量范围为 0.05%–1.5%。

研究设置两个相互补充的队列：参考队列 42 例受者、243 份血浆样本，用于观察术后近一年的动态变化；活检队列 41 例受者、56 份样本，用于分析排斥相关表现及治疗前后的变化。两队列存在受者重叠，合计 80 例独立受者。

图2　研究队列与样本构成。参考队列用于纵向观察；活检队列包含活检时及部分治疗后的样本。来源：Zheng 等，2026，CC BY。

三、术后动态：第 8 周进入相对稳定范围

参考队列的纵向随访显示，术后不同阶段 dd-cfDNA 水平并不相同：第 1 周中位数 0.29%，第 2 周 0.27%，第 4 周 0.21%，第 8 周 0.19%，第 24 周 0.21%，第 48 周 0.20%。整体上，第 4 周起出现稳定趋势，第 8 周进入相对稳定范围。

这一变化提示，dd-cfDNA 结果的解读需要结合术后时间窗与连续检测趋势；围手术期与缺血-再灌注损伤相关的信号，宜结合临床谨慎解读。

表1　参考队列各时间点的 dd-cfDNA 水平。依据论文 Table 2 参考队列部分整理。

参考队列受者经临床评估保持稳定，但未常规接受监测性活检，因此上述「参考水平」不等同于经病理证实的无排斥水平。

图3　不同术后时间点的 dd-cfDNA 分布。图中保留各时间点样本量与中位数。来源：Zheng 等，2026，CC BY。

四、排斥相关变化：0.87% 与 0.23% 的差异

在活检队列中，急性排斥（acute rejection，AR）组的 dd-cfDNA 中位数为 0.87%，非排斥组为 0.23%，差异具有统计学意义（P＜0.001）。分型分析显示，中重度急性细胞性排斥（acute cellular rejection，ACR）与较高级别抗体介导的排斥（antibody-mediated rejection，AMR）均伴随更高的 dd-cfDNA 水平。

图4　非排斥组与急性排斥组的 dd-cfDNA 比较。AR 为急性排斥，NR 为非排斥。来源：Zheng 等，2026，CC BY。

表2　不同排斥亚型与对照组的 dd-cfDNA 中位数比较。P 值为各两组间比较，依据论文结果部分与 Figure 3 整理。

轻度急性细胞性排斥（ACR 1R）与 ACR 0R 之间未观察到显著差异，提示 dd-cfDNA 对不同程度排斥的识别能力仍需进一步研究。作为移植物损伤相关的分子指标，其结果需要与病理及其他临床检查共同解读。

五、诊断表现：0.33% 是本队列的探索性阈值

以活检结果为参照，dd-cfDNA 区分急性排斥的受试者工作特征曲线下面积（area under the curve，AUC）为 0.874；在本队列探索得到的 0.33% 阈值下，敏感性 81.0%、特异性 85.7%、阳性预测值 89.5%、阴性预测值（negative predictive value，NPV）75.0%。

表3　急性排斥识别的诊断指标。依据论文主要诊断分析整理，AUC 采用整体 ROC 分析结果。

图5　急性排斥及其亚型的 ROC 曲线。AR、ACR、AMR 的 AUC 分别为 0.874、0.832、0.875。来源：Zheng 等，2026，CC BY。

0.33% 是与本次检测方法、入组人群及研究设计相关的探索结果，尚不能作为所有东亚受者的统一标准。活检队列主要来自临床疑似排斥的受者，NPV 为 75.0%，因此低于该值不能单独作为排除排斥或推迟活检的依据，其应用仍需在更大规模的多中心队列中外部验证。

六、治疗监测：两周内从 0.98% 降至 0.38%

研究对 14 例接受抗排斥治疗且具有配对样本的受者进行分析。治疗前 dd-cfDNA 中位数为 0.98%，治疗 2 周后降至 0.38%，差异具有统计学意义（P＝0.011）。分组分析中，ACR 受者的下降达到统计学显著性，AMR 亚组未达到显著性。

图6　14 例受者抗排斥治疗前后的 dd-cfDNA 水平，治疗后检测时间为 2 周。来源：Zheng 等，2026，CC BY。

受限于样本量，当前结果为治疗反应监测提供了研究线索，尚不能据此单独指导药物调整。

七、奥根诊断的角色：提供 dd-cfDNA 检测与方法学支持

奥根诊断为本研究提供了基于 IndelTrace™ 2.0 平台的 dd-cfDNA 检测服务与方法学技术支持。该平台采用多重 PCR 靶向扩增结合 Indel 标记的技术路线，定量范围为 0.05%–1.5%，不依赖单分子标签与供体基因型。

本次合作将国产 Indel 检测方法应用于阜外医院的前瞻性临床研究，为心脏移植的无创监测积累了本土数据。阜外医院在心脏移植与术后管理方面积累深厚：据公开报道，截至 2025 年 6 月累计完成心脏移植逾 1,500 例，受者 5 年生存率 88.4%；刘盛教授团队承担国家重点研发计划及多项国家自然科学基金项目，持续推进心脏移植临床研究。

移植损伤无创监测相关的检测项目与技术说明，见移植损伤无创监测。

参考资料

1. Zheng S, Liu S, Zhu Z, et al. Prospective evaluation of donor-derived cell-free DNA for noninvasive detection of acute rejection in an Asian heart transplant population. Transplant International. 2026;39:16415. DOI: 10.3389/ti.2026.16415（开放获取，CC BY）。

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